研究生教学

英文名称：Modern histochemical technique

课程类型：□高水平课程 □国际化课程 □高水平国际化课程 ■一般课程

课程类别：■一级学科基础程 □二级学科基础课程 □专业课程

考核方式： 开卷+闭卷

教学方式：大课授课和实验操作

适用层次： 硕士 ■ 博士 □

开课学期：第一学期

总学时/讲授学时：32            

学分：2

适用专业：医学各专业

〈现代组织化学技术〉教学大纲

（注：教学内容中画横线的部分为掌握内容）

第一篇 组织化学

第一章 概述

目的要求

1．掌握组织化学的基本概念。

2．掌握组织化学技术的基本要求。

教学内容

1．组织化学的定义、组织化学与细胞学、组织学和生物化学的关系，组织化学的基本原理。

2．组织化学的发展简史。

3．组织化学技术的基本要求。

第二章 组织化学标本的制备

目的要求

1．掌握固定的目的。

2．掌握常用固定剂的作用。

3．掌握石蜡切片法和恒冷箱切片法。

4．掌握常用的组织化学定量方法。

教学内容

1．组织固定的目的。常用固定剂的作用：甲醛、戊二醛和乙醇。固定液的选择。

2．组织切片的制备：石蜡切片法、恒冷箱切片法、冷冻干燥法和冷冻替代法。

3．常用的组织化学定量方法。

第三章 若干组织化学染色技术

目的要求

1．掌握高碘酸Schiff(PAS)反应。

2．掌握碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、三磷酸腺苷酶、乙酰胆碱酯酶和一氧化氮合酶的显示法。

教学内容

1．显示多糖的高碘酸Schiff(PAS)反应。

2．显示DNA的福尔根反应，显示DNA和RNA的甲绿派若宁法。

3．醛复红染色法。

4．酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、5’-核苷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、三磷酸腺苷酶、非特异性酯酶、乙酰胆碱酯酶、细胞色素氧化酶、单胺氧化酶、过氧化物酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶和一氧化氮合酶的显示法。

第二篇 免疫组织化学

第一章 概述

目的要求

1．掌握免疫组织化学的基本原理。

2．掌握免疫组织化学技术的基本要求。

教学内容

1．免疫组织化学的提出，免疫组织化学与组织化学、免疫化学和生物化学的关系。免疫组织化学的基本原理。

2．免疫组织化学的发展简史。

3．免疫组织化学技术的基本要求。

第二章 抗原和抗体

目的要求

1．掌握抗原和抗体的定义。

2．掌握抗体的分子结构。

教学内容

1．抗原的定义，完全抗原，半抗原，抗原的特异性，抗原决定簇，抗原的异物性。

2．抗体的定义、分子结构和免疫活性。

第三章 免疫组织化学技术的原理

目的要求

1．掌握免疫荧光技术直接法和间接法的原理。

2．掌握免疫荧光双标记法的原理。

3．掌握PAP法、ABC法和免疫酶双标记法的原理。

4．掌握免疫胶体金技术的原理。

教学内容

1．免疫荧光技术：抗原直接定位法、抗体直接定位法、抗原间接定位法、抗体间接定位法和免疫荧光双标记法的原理。

2．免疫酶技术：抗原间接定位法、酶桥法、PAP法和免疫酶双标记法的原理。

3．亲合素-生物素法：LAB法、 BAB法、 ABC法和 SABC法的原理。

4．免疫胶体金技术：免疫胶体金染色法，蛋白A胶体金法，胶体金双标法的原理。

第四章 免疫组织化学标本的制备

目的要求

1．掌握固定的目的。

2．掌握灌注固定的方法。

3．掌握组织切片的制作。

教学内容

1．固定的目的，灌注固定的方法。

2．石蜡包埋切片法、恒冷箱切片法和振动切片法。

第五章 若干免疫组织化学标记程序

目的要求

1．掌握免疫荧光染色。

2．掌握PAP法、ABC法、SABC法、 蛋白A胶体金放大法和免疫金银染色法。

3．掌握电镜PAP法包埋前染色

4．掌握免疫荧光双重染色、PAP-PAAP双重染色、电镜水平的胶体金双重染色。

教学内容

1．免疫单标记程序：光镜水平的免疫荧光染色（间接法）、PAP法、ABC法、SABC法、 免疫胶体金法、蛋白A胶体金法和免疫金银染色法以及电镜水平的PAP法包染色和PAP法包埋后染色。

2．免疫双标记染色程序：光镜水平的PAP-PAAP双重染色、免疫荧光双重染色和PAP-b-Gal双重染色以及电镜水平的PAP-b-Gal双重染色、DAB-TMB双重染色和胶体金又重染色。

第三篇 原位杂交组织化学

第一章 原位杂交组织化学的分子生物学基础

目的要求

1．了解核酸的分子结构。

2．掌握核酸的特性。

教学内容

1．核酸的分子结构：核酸的化学组成，核酸的一级结构，高级结构。

2．核酸的特性：DNA的变性与复性，RNA的功能，遗传信息的传递（DNA的复制、转录和翻译）。

第二章 核酸分子杂交概述

目的要求

1．掌握核酸分子杂交的定义和原理。

2．掌握常用核酸探针的种类和特点。

3．掌握核酸探针标记的原理。

教学内容

1．核酸分子杂交的定义和基本原理。

2．常用核酸探针的种类和特点：cDNA探针、cRNA探针、寡核苷酸探针。

3．核酸探针标记的基本原理：放射性同位素标记（缺口平移法、随机引物延伸法、末端标记法、体外转录法），非放射性标记（酶促反应标记、化学标记）。

4．常用核酸探针标记技术：寡核苷酸探针3’-末端放射性同位素标记技术，寡核苷酸非放射性加尾标记法，cRNA探针的体外转录标记技术（质粒转化、扩增、抽提及纯化，线性DNA模板的制备，地高辛标记探针的制备）。

第三章 原位杂交组织化学的基本原理和基本过程…………………………99

目的要求

1．掌握原位杂交组织化学标本的制备、杂交前处理、杂交反应、杂交后处理。

2．掌握原位杂交组织化学非放射性标记探针的显示方法。

3．掌握非放射性原位杂交显示系统的对照对照方法。

4．掌握原位杂交组织化学应用生物素标记的寡核苷酸探针和应用地高辛标记的cRNA探针的操作法。

5．了解放射性同位素标记探针的显示方法。

6．了解组织对照、探针对照、杂交反应对照和显示系统对照。

7．了解双重标记原位杂交技术和电镜原位杂交技术。

教学内容

1．原位杂交组织化学标本的制备：取材、固定、切片。

2．杂交前处理：增强组织的通透性和核酸探针的穿透性和减低背景染色处理。

3．杂交反应：双链DNA探针和靶DNA变性、杂交液、探针的长度、探针的浓度、杂交温度和时间和杂交严格度。

4．杂交后处理

5．显示：放射性同位素标记探针的显示和非放射性标记探针的显示方法。

6．对照试验

（1）组织对照：Southern或Northern印迹反应和免疫组织化学。

（2）探针对照：已知阳性组织和已知阴性组织对照和有意义链RNA探针做对照

吸收试验。

（3）杂交反应对照：空白试验和杂交前用核酸酶预处理标本。

（4）显示系统对照：放射自显影显示系统对照和非放射性原位杂交显示系统对照。

7．原位杂交组织化学常用操作程序

（1）应用放射性同位素标记的寡核苷酸探针。

（2）应用生物素标记的寡核苷酸探针。

（3）应用地高辛标记的cRNA探针。

8．双重标记原位杂交技术

（1）结合放射性同位素和非放射性标记探针的双重标记原位杂交。

（2）非放射性标记探针的双重标记原位杂交。

（3）两种同位素标记探针的双重标记原位杂交。

9．电镜原位杂交技术。

（1）电镜原位杂交的特点。

（2）用电镜原位杂交技术的基本程序。

第四章 原位杂交和免疫组织化学结合的双标记技术

目的要求

1．了解原位杂交和免疫组织化学结合的双标记技术的意义。

2．了解原位杂交结合免疫组织化学的双标记技术和免疫组织化学结合原位杂交的双标记技术。

教学内容

1．原位杂交和免疫组织化学结合双标记技术的意义。

2．原位杂交结合免疫组织化学的双标记技术。

3．免疫组织化学结合原位杂交的双标记技术。

使用教材：

李和、周莉主编。组织化学与细胞化学技术（第二版），人民卫生出版社，2014年

主要参考书：

李继承主编，组织学与胚胎学实验技术，人民卫生出版社，2010年